УДК 616.314.003.725

Ó Коллектив авторов, 2010

Поступила 02.11.2009 г.

Е.А. ГУРЬЯНОВА, Л.А. ЛЮБОВЦЕВА,

Е.В. ЛЮБОВЦЕВА, А.А. ШАБУКОВА,

Д.И. АХМЕТОВА

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК КОЖИ

В ОБЛАСТИ ТОЧЕК АКУПУНКТУРЫ

Чувашский государственный университет им. Ульянова, Чебоксары

Целью исследования явилось изучение количественного состава иммунопозитивных клеток в образцах кожи человека в области акупунктурных точек IG19, TR17, VB2. Содержание Т-хелперов, Т-супрессоров, макрофагов, пролиферирующих клеток определяли с использованием моноклональных антител к дифференцированным антигенам CD4, CD68, CD45R, PCNA. Были выявлены отличия между участками кожи в точках акупунктуры TR 17 и IG 19 и в контрольных зонах, взятых вблизи исследуемых точек. Число иммунопозитивных клеток во всех образцах кожи в точке IG 19 и TR 17 преобладало над числом клеток, находящихся в контрольной зоне точек TR 17 и IG 19. Корреляционный анализ показал, что в точке акупунктуры IG 19 выявлены сильные положительные корреляционные связи между Т-хелперами и клетками в стадии пролиферации в сосочковом слое дермы и возле сальных желез, а также между макрофагами и клетками в стадии пролиферации около волосяных фолликулов.

Research objective was studying of quantitative structure immune cells in samples of a skin of the person in area acupuncture points IG19, TR17, VB2. Maintenance T-helper, T-supressor, macrophages, PSNA-cells defined with use monoclonal antibodies to differentiated antigenes CD4, CD68, CD 45R, PCNA. Differences between skin sites in acupuncture points TR17 and IG19 and in the inspection zones taken near to investigated points have been revealed. The number of immune cells in all samples of a skin in point IG19 and TR17 prevailed over number of the cells which are in an inspection zone of points TR17 and IG19. The correlation analysis has shown that in a acupuncture point IG19 strong positive correlation communications between T-helper and cells in a stage proliferation in papillary and layer of derma and near sebaceous glands, and as between macrophages and PSNA-cells about hair follicles are revealed.

Кожа рассматривается как орган с выраженными иммунологическими функциями. В ней реализуется широкий спектр иммунных реакций, протекают почти все известные виды иммунопатологических процессов и иммунного воспаления [6]. Кожа является одновременно и центральным, и периферическим органом кроветворения. Основными участниками иммунных реакций в коже являются макрофаги, эпидермальные, дермальные и гиподермальные лимфоциты, клетки Лангерганса,тканевые базофилы, гранулоциты крови, кератиноциты и, опосредованно, все клетки соединительной ткани дермы и гиподермы [7]. В целом на любое антигенное воздействие или воздействие, сопровождающееся повреждением структур кожи, формируется активная ответная реакция, в которой задействованы практически все системы кожных покровов. Кожа в проекции точек акупунктуры (ТА) отличается от участков, находящихся рядом, как по биофизическим, так и по ряду морфологических параметров [2, 4]. Информация с ТА передается на корреспондирующиеся с ней части сомато-висцеральной системы. Многие ТА обладают иммуномодулирующим эффектом, изменяя уровень иммуноглобулинов, активность Т- и В-лимфоцитов, макрофагов. показатели лейкоформулы и др. [3, 8, 9]. Поскольку именно ТА является местом запуска саногенетических процессов в организме, представляет большой интерес изучение клеточного состава кожи в области ТА. Однако особенности распределения иммунокомпетентных клеток в коже в проекции ТА не исследованы [4].

По литературным данным, макрофаги (CD68) составляют 21-34% всех клеток соединительной ткани дермы. В нормальных условиях большее их число залегает в участках, имеющих обильное кровоснабжение. Т-хелперы (СD4) преимущественно активированы в дерме, в частности в периваскулярной зоне, и постоянно готовы к распознаванию антигенов, представляемых эндотелиоцитами. Пролиферативная активность клеточных элементов является одним из основных показателей биологического поведения [5, 6].

Цельюнастоящего исследования явилось определение локализации, численного соотношения и морфометрических характеристик макрофагов (CD68), Т-хелперов (CD4), Т-супрессоров (CD45R) и клеток в стадии пролиферации (PSNA)в некоторых ТА лица и вне их.

Материал и методы.Исследованы 72 образца кожи, взятые у 12 женщин во время операции фэйс-лифтинга (после предварительного согласия пациенток) в следующих точках:

-TR 17 -углубление кзади от основания мочки уха, между сосцевидным отростком и ветвью нижней челюсти, в глубине соответствует шилососцевидному отверстию.

-VB2 — в углублении между ушной раковиной и задним краем нижней челюсти, на уровне межкозелковой вырезки.

— IG19 — между козелком ушной раковины и височно-нижнечелюстным суставом, в углублении, которое прощупывается при открывании рта [3].

— контрольные точки взяты сбоку от меридиана на расстоянии 1 см от ТА IG 19 и TR 17.

Локализация ТА определялась по анатомо-топографическому методу и с помощью прибора «Элитерис». Электрокожное сопротивление в ТА составляло 55-65, вне ТА — более 100 кОм.

Иммуногистохимическое исследование проводилось методом трехэтапного непрямого иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против антигенов-маркеров иммунокомпетентных клеток (CD4, CD68, CD45R, PSNA) .

Представление о количественном распределении иммунопозитивных клеток получили методом их подсчета в 10 полях зрения под микроскопом «Альтами», при увеличении об. 40, с последующим вычислением для каждого случая среднего арифметического значения.

Корреляционный анализ проводился на персональном компьютере по стандартной программе MicrosoftExcelдля выявления достоверной взаимосвязи между изучаемыми показателями в норме. Значимость различий определяли по критерию Стьюдента (t). Различия считали значимыми при Р<0,05.

Результаты и обсуждение. В коже человека Т-хелперы (CD4), в основном, локализуются в сосочковом слое дермы. В точке IG19 число иммунопозитивных клеток составило 25,2 ± 2,5, в контроле — 19,2±2,8. В точке TR17 число Т-хелперов равнялось 23,8±2,1; в контрольной зоне — достоверно снижено в 1,6 раза (p<0,05) (табл.1).

В области сальной железы в проекции ТА IG19 число CD4-позитивных клеток составило 19,8 ± 1,3. Установлено, что в контрольной зоне их число ниже 12,0 ± 1,2 (p<0,05). В проекции ТА TR17 около сальной железы число CD4-позитивных клеток достоверно выше -13,8±1,1 (p<0,05), чем в контроле — 7,6 ± 0,4.

Таблица 1

Число иммунокомпетентных клеток в различных структурах кожи

в проекции точек акупунктуры IG19 и TR17, М±m

_____________

М-среднее значение, m- стандартное отклонение, *р<0,05 (по сравнению с контролем)

Число CD4-позитивных клеток около волосяного фолликула в контрольной зоне преобладало над таковыми в проекции ТА TR17 и IG19. Присутствие большого числа CD4-позитивных клеток наблюдалось и в периваскулярной зоне, однако достоверных различий между точкой и контролем не выявлено.

В распределении и численном соотношении CD68-позитивных клеток в проекциях ТА IG19 и TR17 достоверных различий установлено не было. Число CD68+макрофагов невелико как в ТА, так и в контрольной зоне. Они распределялись преимущественно около сальных желез и в периваскулярной зоне (в ТА IG19 — 1,2 ± 0,4, в контроле — 0,6 ± 0,1). Наибольшее их число обнаружено в проекции точки IG19.

Анализ популяции клеток в стадии пролиферации в коже человека установил, что чаще всего они локализуются в сосочковом слое дермы, около сальных и потовых желёз. Число клеток в стадии пролиферации в проекции ТА выше, чем в контроле. Так, около сальной железы в проекции точки IG19 число PSNA-позитивных клеток составило 31,8± 2,6, в контроле — 20,7± 1,6 (p<0,05), в проекции ТА TR17 — 11,7±1,5, в контроле — 9,9±1,2 (p<0,05). В эпителии и периваскулярной зоне число клеток в стадии пролиферации меньше (табл. 1).

Значимые различия наблюдались в численном соотношении PSNA-позитивных клеток в проекциях точек акупунктуры IG19 и TR17: в ТА IG19 число клеток в стадии пролиферации выше, чем в ТА TR17. Подобная картина наблюдалась и в контрольной зоне. Так, в сосочковом слое дермы в ТА IG19 число PSNA-позитивных клеток составило 15,6±1,6, в контрольной зоне — 13,1±1,2 (p<0,05). В ТА TR17 число клеток в стадии пролиферации достигало 11,3±0,8, в контроле — 7,5±0,6 (p<0,05).

Таким образом, в ТА IG19 заметно большее число Т-хелперов и клеток в стадии пролиферации, чем в ТА TR17.

В исследуемых структурах кожи в области ТА определялось небольшое число CD45R-позитивных клеток (Т-супрессоров), а в эпителии, потовых и сальных железах, около волосяных фолликулов и в гиподерме выявлялись лишь единичные иммунопозитивные клетки: в эпителии — 0,6±0,07, в гиподерме — 0,5±0,04. Их преимущественная локализация — это периваскулярная зона в проекции ТА IG19, где в одном поле зрения обнаруживались 1,1±0,2 клетки. В контрольной зоне число CD45R-позитивных клеток достоверно снижено: 0,1±0,01 клетки в периваскулярной зоне.

Согласно канонам акупунктуры, иммуномодулирующие свойства не характерны для ТА IG19 [3]. Однако на основании нашего исследования можно предположить, что данная точка являлась мощным плацдармом для запуска комплекса иммунных реакций. Более того, ТА IG19 и VB2 локализовались перед козелком и находились на близком расстоянии друг от друга. Между тем локализация и состав иммунокомпетентных клеток ТА VB2 достоверно не отличались от ТА TR17, лежащей за ушной раковиной.

Для оценки взаимоотношений иммунокомпетентных клеток в точке IG19 был проведен корреляционный анализ. Сильные положительные корреляционные связи выявлены между CD4- и PCNA-иммунопозитивными клетками в сосочковом слое дермы и в волосяном фолликуле. В остальных случаях обнаружены умеренные и слабые корреляционные связи (табл. 2).

Таблица 2

Корреляционные взаимоотношения между иммунопозитивными клетками

в проекции точки акупунктуры IG19

_____________

цветом выделены сильные корреляционные связи

Следует отметить, что в сальных железах была обнаружена смешанная жировая ткань, состоящая из белой жировой и типичной бурой жировой ткани. По данным литературы, у взрослых бурая жировая ткань почти не определяется и, в отличие от белой жировой ткани, сосредоточена лишь в нескольких чётко очерченных участках тела (между лопаток, в подмышечных впадинах, в воротах почек) [1]. Она служит источником развития некоторых видов опухолей [10]. Клетки бурой жировой ткани имеет большие размеры — до 60 мкм и полигональную форму. Их округлое ядро располагается в центре клетки или эксцентрично. В нашем случае выявлены типичные клетки бурой жировой ткани: ядро несколько смещено к периферии адипоцита, а цитоплазма содержала множественные жировые капли различных размеров (наиболее крупные из них достигали 25 мкм).

Выводы. 1. В коже человека в области точек акупунктуры Т-хелперы локализуются, в основном, свободно в сосочковом слое дермы, около сосудов и сальных желез. Число Т-хелперов, локализующихся в сосочковом слое и около сальных желёз, достоверно выше в проекции точки акупунктуры по сравнению с рядом лежащим участком.

2. Как в проекции точки акупунктуры, так и в рядом находящихся участках выявляются единичные макрофаги и Т-супрессоры.

3. Число CD68-, CD-45R-, PCNA-позитивных клеток в точке IG19 и TR17 преобладало над числом клеток, находящихся в контрольной зоне во всех исследованных структурах.

4. В точке акупунктуры IG19 выявлены сильные положительные корреляционные связи между Т-хелперами и клетками в стадии пролиферации в сосочковом слое дермы и возле сальных желез, а также между макрофагами и клетками в стадии пролиферации около волосяных фолликулов.

5. В коже лица перед козелком и в заушной области обнаружены участки типичной бурой жировой ткани.

Рис. 1. CD4+позитивные клетки около сальной железы:

а — в проекции точки акупунктуры IG19; б — контроль. Иммуногистохимическая окраска на CD4+позитивные клетки. Ув. 200

Рис. 2. Единичные CD68 + позитивные клетки около волосяного фолликула:

а — в проекции точки акупунктуры IG19, б — вне точки акупунктуры. Иммуногистохимическая окраска на CD68+позитивные клетки. Ув. 200

Рис. 3. Клетки в стадии пролиферации около волосяного фолликула:

а — в проекции точки акупунктуры IG19, б — вне точки акпунктуры. Иммуногистохимическая окраска на PSNA+позитивные клетки. Ув. 200

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Афанасьев Ю.И., Колодезникова Е.Д. Бурая жировая ткань. Иркутск: Изд-во Иркут. ун-та, 1995. 48 с.

2. Вержбицкая Н.И., Кромин А.А.Морфофункциональные параметры точек акупунктуры и связанных с ними внутренних органов в разных условиях эксперимента. Теория и практика рефлексотерапии. Саратов: Изд-во Саратов. ун-та, 1981. 46 с.

3. Вогралик В.Г., Вогралик М.В.Акупунктура. Основы традиционной восточной рефлексодиагностики и пунктурной адаптационно-энергизирующей терапии. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2001. 504 с.

4. Лиманский Ю.П., Гуляр С. А., Самосюк И.З. Научные основы акупунктуры // Рефлексотерапия. 2007. №2(20).С. 9-18.

5. Московский А.В., Любовцева Л.А, Шумский А.В.Клиническая морфология и иммунология пульпы зуба. Чебоксары: Изд-во Чуваш. ун-та, 2008. 276 с.

6. Ноздрин В.И., Барашкова С.А., Семченко В.В.Кожа и ее производные. Омск; Орел, 2005. 200 с.

7. Смирнова И.О. и др. Нейроиммуноэндокринология кожи и молекулярные маркеры её старения. СПб.: ДЕАН, 2005. 288 с.

8. Jong M.S. et al. Effects of electro-acupuncture on serum cytokine level and peripheral blood lymphocyte subpopulation at immune-related and non-immune-related points // Acupunct Electrother Res.2006;31(1-2):45-59.

9. Lai Met al. Effects of electroacupuncture of «Zusanli» (ST 36), «Hegu» (LI 4) and/or «Sanyinjiao» (SP 9) on immunofunction in gastric carcinectomy rats //Zhen Ci Yan Jiu.2008. Aug;33(4). P. 245-249.

10.Putti T.C et al.Breast pathology practice: most common problems in a consultation service // Histopathology. 2005. Nov. 47 (5). Р. 445-457.