УДК 616.831.71-091

© Коллектив авторов, 2013

Поступила 22.07.2013 г.

O.A. ЕФРЕМОВА, Л.A. ЛЮБОВЦЕВА,

А.И. ШЕПТУХИНА, В.В. КАШКИРОВ, Е.А. ГУРЬЯНОВА

ПОСТМОРТАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СТРУКТУРАХ МОЗЖЕЧКА

Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова, Чебоксары

Проведено посмертное люминесцентно-гистохимическое исследование коры мозжечка крыс самцов. В коре мозжечка выявлены люминесцирующие структуры на уровне ганглионарного и зернистого слоев.

Ключевые слова: мозжечок, постмортальные изменения, катехоламины, серотонин, гистамин.

Наиболее чувствительными клетками являются нервные клетки головного мозга при любых стрессовых ситуациях, в том числе и после гибели человека [1, 2, 4].

Анализ экспериментального материала убеждает в том, что восстановление функций центральной нервной системы у оживлённых животных происходит в следующей последовательности: сначала восстанавливается функция продолговатого и спинного мозга, затем среднего, промежуточного и, наконец, мозжечка и коры больших полушарий. В процессах умирания организма и при его оживлении и возвращении всех его функций к нормальному состоянию ведущую роль играет центральная нервная система.

Проблема оживления человека и животных после прекращения сердцебиения и дыхания представляет большой теоретический и практический интерес [1, 3, 5]. Установлено, что после наступления смерти организма как целого отдельные ткани и органы в течение некоторого времени остаются еще жизнеспособными.

В связи с этим целью нашего исследования явилось выявление постмортальных особенностей локализации нейроаминов в биоаминсодержащих клетках мозжечка.

Материалы и методы исследования . Был исследован мозжечок 10 крыс-самцов. Мозжечок изымали под глубоким эфирным наркозом через 5, 10, 15 мин после смерти животных. Время наступления смерти считалось с момента остановки дыхания.

Свежезамороженные криостатные срезы органов толщиной 15 мкм исследовались люминесцентно-гистохимическими методами:

1. Фалька-Хилларпа (1969) для выявления моноаминов: катехоламинов (КА) и серотонина.

2. Для идентификации гистаминсодержащих структур мозжечка ставили реакцию по Кроссу и соавт. (1971).

3. С целью определения влияния вегетативной нервной системы в процессе умирания определяли серотониновый индекс.

4. Метод спектрофлуориметрии использовался для идентификации количественного содержания нейроаминов в тканевых структурах мозжечка.

5. Статистическую значимость данных оценивали по t-критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение. При исследовании на гистамин мозжечка, изъятого через 5 мин после установления смерти животного, клетки выявлялись в молекулярном, ганглионарном и зернистом слоях. В молекулярном слое определялись единичные, тускло люминесцирующие клетки (табл. 2).

На уровне ганглионарного слоя чётко определялась цепочка клеток крупных размеров различной формы, в том числе и вытянутой грушевидной. Клетки люминесцировали ярким желтоватым свечением. В некоторых из них просматривались по 2-3 крупные разнокалиберные гранулы, которые мы отнесли к гранулярным люминесцирующим клеткам (ГЛК) (рисунок). Средние числовые показатели клеток этого слоя составили 6±0,26 на поле зрения.

Локализация гистамина в структурах мозжечка: а — гранулярная люминесцирующая клетка. Метод Кросса. ЛЮМАМ — 4. Об. 40. Гомаль 1,7

Наряду с крупными клетками в этом слое встречались мелкие пылевидные гранулы, люминесцирующие тускло-желтоватым свечением. Мы предполагаем, что это дегранулированные нервные клетки. Нами выявлено, что содержание гистамина в клетках этого слоя составило 2,3 у.е. (табл. 1). В зернистом слое определялись мелкие округлые клетки, люминесцирующие желтоватым свечением. Их число составило 11±0,03 на поле зрения.

При исследовании на гистамин мозжечка, изъятого через 10 мин после смерти животного, на препарате выявлялась цепочка клеток в основном округлой формы, люминесцирующих уже тусклым желтоватым свечением. Нами установлено, что содержание гистамина в этих клетках составило 1,2 у.е. и уменьшилось в 1,9 раза (р<0,05) по сравнению с цитоструктурами мозжечка, изъятого через 5 мин после смерти (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 4±0,11 и уменьшилось в 1,5 раза.

При исследовании на гистамин мозжечка, изъятого через 15 мин после смерти животного, выявлялась едва различимая цепочка из мелких клеток, люминесцирующих очень тусклым желтоватым свечением. Нами установлено, что содержание гистамина в этих клетках составило 1,8 у.е. и имело тенденцию к увеличению в единичных клетках по сравнению с предыдущим сроком (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 2±0,08 и уменьшилось в 2 раза по сравнению с предыдущим сроком.

При исследовании на гистамин мозжечка, изъятого через 20 мин после смерти животного, люминесцирующие структуры не определялись.

При исследовании на КА и серотонин мозжечка, изъятого через 5 мин после смерти, клетки также обнаруживались в молекулярном, ганглионарном и зернистом слоях (табл. 2).

На препарате на уровне ганглионарного слоя также выявлялась цепочка клеток округлой формы, люминесцирующих ярким желтоватым свечением. В цитоплазме некоторых из них просматривались по 2-4 крупные разнокалиберные гранулы. Мы также предполагаем, что это ГЛК. Средние числовые показатели клеток этого слоя составили 8±0,56 на поле зрения.

В этом же слое выявлялись мелкие распавшиеся клетки, люминесцирующие тусклым свечением. Содержание КА в клетках этого слоя составило 1,4 у.е., а содержание серотонина — 1,3 у.е. (табл. 1). В зернистом слое также определялись мелкие округлые клетки, люминесцирующие желтоватым свечением. Их число составило 8±0,29 на поле зрения.

При исследовании на КА и серотонин мозжечка, изъятого через 10 мин после смерти животного, выявлялись различной формы дегранулировавшие клетки, люминесцирующие также ярким желтоватым свечением. Более мелкие клетки с пылевидными гранулами люминесцировали тусклым желтоватым свечением. Содержание КА в клетках этого слоя составило 1,3 у.е., а содержание серотонина — 1,2 у.е. (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 6±0,34 и уменьшилось в 1,3 раза по сравнению с предыдущим сроком.

Таким образом, содержание КА и С по сравнению с цитоструктурами мозжечка, изъятого через 5 мин после смерти, не изменилось (р<0,05).

При обработке препаратов на КА и серотонин через 15 мин после гибели крысы выявлялись одиночные крупные клетки, некоторые из них имели хлопьевидную форму и тускло люминесцировали. Число люминесцирующих клеток составило 3±0,53 и уменьшилось в 2 раза по сравнению с предыдущим сроком. Содержание КА в этих клетках соответствовало 3,8 у.е., увеличилось в 2,9 раза (р<0,05) по сравнению с цитоструктурами мозжечка, изъятого через 10 мин, а содержание серотонина — 3,5 и возросло в 2,7 раза (р<0,05) (табл. 1).

При исследовании на КА и серотонин мозжечка, изъятого через 20 мин после смерти животного, выявлялись едва различимые распавшиеся клетки, люминесцирующие очень тусклым желтоватым свечением. Нами установлено, что содержание КА в этих клетках составило 3,9 у.е., а содержание серотонина — 3,7 и осталось практически без изменений по сравнению с предыдущим сроком (табл. 1).

Таблица 1

Интенсивность люминесценции биогенных аминов в структурах мозжечка, у.е.

____________

Р<0,05 — по сравнению с контрольной группой.

Таблица 2

Содержание люминесцирующих структур в мозжечке, шт

Установлено, что серотониновый индекс в наблюдаемых структурах мозжечка на сроке извлечения через 5, 10, 15, 20 мин после смерти составил 0,9. Таким образом, нами было установлено, что на всех сроках в люминесцирующих клетках преобладали КА над серотонином, из чего следует, что вегетативная нервная система реагирует на умирание организма, хотя в ней происходит истощение нейроаминов.

Выводы:

1. Содержание гистамина в цитоструктурах мозжечка постепенно снижается, а к 20 мин после смерти животных не определяются люминесцирующие структуры.

2. Содержание КА и серотонина в отдельных клетках мозжечка после смерти со срока 15 мин увеличивается в 3 раза.

3. В цитоструктурах мозжечка серотониновый индекс на всех сроках извлечения после смерти был ниже 1.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гурвич А.М. Стойкие вегетативные состояния и смерть мозга / А.М. Гурвич // Биомедицинская этика / под ред. академика РАМН В.И. Покровского. — М.: Медицина, 1997. — С. 189-197.

2. Патологическая физиология: учебник для медицинских вузов / А.Д. Адо [и др.]. — М.: Триада-Х, 2000. — 607 с.

3. Смерть мозга при неврологических заболеваниях / Л.М. Попова [и др.] // Анестезиология и реаниматология. — 1980. — № 5. — С. 24.

4. Судебная медицина: учебник / под ред. В.Н. Крюкова. — 5-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 2006. — 448 с.

5. Уолкер А.Э. Смерть мозга: пер. с англ./ А.Э. Уолкер; под ред. проф. А.М. Гурвича. — М.: Медицина, 1988. — 288 с.

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

Ефремова Ольга Александровна

ассистент кафедры цитологии, эмбриологии, гистологии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им И.Н. Ульянова», кандидат биологических наук

Любовцева Любовь Алексеевна

заведующая кафедрой цитологии, эмбриологии, гистологии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им И.Н. Ульянова», доктор биологических наук, профессор,

Шептухина Алёна Игоревна

студентка медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им И.Н. Ульянова»

Кашкиров Владимир Вячеславович

студент медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им И.Н. Ульянова».

Гурьянова Евгения Аркадьевна

доцент кафедры факультетской терапии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им И.Н. Ульянова», доктор медицинских наук

Адрес для переписки:

428000, Чувашская Республика, Чебоксары, Московский пр-т, 45.

Тел.: + 7 (8352) 45-16-10

E-mail.: oefremoval3@rambler.ru

INFORMATION ABOUT THE AUTHORS:

Olga Aleksandrovna Efremova

assistant of cytology, embryology, histology department at the FSBEI HPE «the Chuvash State University named after I.N. Ulyanov», Ph.D. of Biology

Lyubov Alekseevna Lyubovtseva

head of cytology, embryology, histology department at the FSBEI HPE «the Chuvash State University named after I.N. Ulyanov», Doctor of Biology, professor

Alyona Igorevna Sheptukhina

student of medical faculty at the FSBEI HPE «the Chuvash State University named after I.N. Ulyanov»

Vladimir Vyacheslavovich Kashkirov

student of medical faculty at the FSBEI HPE «the Chuvash State University named after I.N. Ulyanov»

Evgeniya Arkadyevna Guryanova

associate professor of faculty therapy department at the FSBEI HPE «the Chuvash State University named after I.N. Ulyanov», Doctor of Medicine

Correspondence address:

Moskovsky av., 45, Cheboksary, Chuvash Republic, 428000

Tel.: +7 (8352) 45-16-10

E-mail: oefremoval3@rambler.ru

O.A. EFREMOVA, L.A. LUBOVTSEVA,

A.I. SHEPTUKHINA, V.V. KASHKIROV, E.A. GURYANOVA

POSTMORTEM CHANGES IN CEREBELLUM STRUCTURES

The Chuvash State University named after I.N. Ulyanov, Cheboksary

The following have been studied postmortem luminescent and histochemical examination of male rats’ cerebellar cortex. It was revealed luminescent structures at the level of ganglionic and granular layers in the cerebellar cortex.

Key words: cerebellum, postmortem changes, catecholamines, thrombotonin, histamine.